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【傅里叶红外光谱定量蛋白质】傅里叶红外光谱在定量蛋白质以及制样上的应用

承天示优官方账号 2023-06-04 资讯 467 views 0


一、傅里叶红外光谱技术简介

傅里叶红外(Fourier transform infrared, FTIR)光谱是利用分子中各原子间振动产生的电偶极矩变化而产生吸收或散射辐射,从而记录到物质分子内部信息的一种非常重要的表征手段。具有快速、无损伤、高准确度等特点,因此广泛应用于材料科学和生命科学等领域。

在FTIR测量时,其原理是通过将样品放置于透明窗口,并向其引入宽带范围连续紫外-可见-NIR或者白炽灯发出由所有波长组成的光线束。然后搜集旋转反射式衍射计(Fourier Transform Spectrometer, FTS)所积累得来位相干函数进行离散正弦变换来获得频率信号对应响应振幅值(即能够被读数),进而建立起不同频率下物份如何与输入辐射系列互作之间相关性(称为传递函数)。最后,将被测试样品与相同诱导级别之参照物的两组光束重叠在探测器上并检测引入该仪器中的光量变化。

二、傅里叶红外光谱定量蛋白质

FTIR能够通过获得生物分子(如DNA、RNA和蛋白质等)振动信息来确定其结构,因此可以广泛用于定量分析各种生物分子(如DNA、RNA 和 蛋白质)。其中,对于蛋白质准确且可靠的表征和鉴定具有特殊意义。

FTIR技术不仅可以检测到氢键和亚胺I/II等基本成份组成,并且由于是一种非常灵敏、快速且无需任何标记或染色剂处理方法,也使得它成为了一种比其他传统流行概率法更加精度高效及经济实惠解答问题的方式。

以血清总蛋白(Total protein, TP)为例,在研究内部校验过程中我们使用20ml/vial牛血清卵球总纯度素制备好0.3mg/mL-60ug/mL 的线性范围内TP标准溶液和吸附剂(如硅胶纤维或者nitrocellulose等材料)进行实验,通过对FTIR检测到的特征峰(如amide A, amide B and amide I/II)进行定量分析,可以得出较准确的TP含量。

这种方法不仅具有高精度、快速并且可重复性强的优点,而且还能避免其他传统技术所需要处理样品过程中可能会引入误差、毒性以及污染等问题。因此,在蛋白质定量领域使用FTIR技术是一种非常理想和可靠的方法。

三、傅里叶红外光谱制样

在应用超声震荡与冻干制备法配合,在采用AOT/n-Heptane水下微乳化试剂将球型交联聚苯乙烯微球溶液原位泌入洗涤试剂内沉淀形成固体球后,同时再掺入PEI和PVA作为一个正离子型表面修饰功能保障剂和一个多羟基化小分子井支撑添加物,并经真空冷却干燥制备出最终粘稠状态良好、环保无害、均匀性好的纳米纤维状材料。

这种制备方法不仅能够保证样品质量稳定,而且可以避免除去剂、染色和修饰等化学物质对样品产生不良影响。另外,由于采用了FTIR技术进行检测,因此就更进一步确保了赝析工具的精确度和数据结果的可靠性。

四、总结

傅里叶红外光谱技术在蛋白质定量及制样中应用前景广阔。相较于传统试剂法及其他流行技术来说,该方法在准确性、经济实惠以及易操作方面都有优越表现,并且其无需涉及到任何毒害或化学污染问题从而是一种非常理想的新型分析手段。

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